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小鼠紅細(xì)胞生成素(EPO)ELISA檢測試劑盒

產(chǎn)品名稱:小鼠紅細(xì)胞生成素(EPO)ELISA檢測試劑盒
英文名稱:Mouse EPO ELISA Kit
貨號:XFM20628
規(guī)格:48T/96T
有效期:6個月
保存條件:2-8℃
用途:本試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織勻漿及相關(guān)液體樣本中小鼠紅細(xì)胞生成素(EPO)的含量。
本產(chǎn)品僅供科研實驗用,不做其他用途。

產(chǎn)品型號:

更新時間:2025-02-06

產(chǎn)品名稱:小鼠紅細(xì)胞生成素(EPO)ELISA檢測試劑盒

英文名稱:Mouse EPO ELISA Kit

貨號:XFM20628

規(guī)格:48T/96T

有效期:6個月

保存條件:2-8℃

用途:本試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿、組織勻漿及相關(guān)液體樣本中小鼠紅細(xì)胞生成素(EPO)的含量。

檢測原理

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。往預(yù)先包被小鼠紅細(xì)胞生成素(EPO)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測抗體,經(jīng)過溫育并徹-底洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的小鼠紅細(xì)胞生成素(EPO)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。

樣品收集、處理及保存方法

以下只是列出樣品采集的一般指南。所有樣本采集過程中,不得使用疊氮鈉做為防腐劑。

1.  血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,將收集于血清分離管的全血標(biāo)本在室溫放置2小時或4℃過夜,然后1000×g離心20 分鐘,取上清即可,或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

2.  血漿:用EDTA或肝素作為抗凝劑采集標(biāo)本,并將標(biāo)本在采集后的30分鐘內(nèi)于2-8℃ 1000×g離心15分鐘,取上清即可檢測,或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

3.  細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本:請1000×g離心20分鐘,取上清即可檢測,或?qū)⑸锨逯糜?20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

4.  組織勻漿:用預(yù)冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織,去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細(xì)胞會影響測量結(jié)果),稱重后將組-織剪碎。將剪碎的組織與對應(yīng)體積的PBS(一般按1:9的重量體積比,比如1g的組織樣品對應(yīng)9mL的PBS,具體體積可根據(jù)實驗需要適當(dāng)調(diào)整,并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中,于冰上充分研磨。為了進(jìn)一步裂解組織細(xì)胞,可以對勻漿液進(jìn)行超聲破碎,或反復(fù)凍融。最后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘,取上清檢測。

注:標(biāo)本溶血會影響最后檢測結(jié)果,因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項檢測。

5.  保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

自備物品

1. 酶標(biāo)儀(450nm)

2. 高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒溫箱

4. 蒸餾水或去離子水

試劑盒組成

名稱

96孔配置

48孔配置

備注

微孔酶標(biāo)板

12孔×8條

12孔×4條

標(biāo)準(zhǔn)品

0.3mL×6管

0.3mL×6管

樣本-稀釋液

6mL

3mL

檢測抗體-HRP

10mL

5mL

20×洗滌緩沖液

25mL

15mL

按說明書進(jìn)行稀釋

底物A

6mL

3mL

底物B

6mL

3mL

終止液

6mL

3mL

封板膜

2張

2張

說明書

1份

1份

自封袋

1個

1個

注:

1.  標(biāo)準(zhǔn)品濃度依次為:4、12、6、3、1.5、0 IU/L

2.  經(jīng)過大量正常標(biāo)本檢驗,標(biāo)本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測范圍內(nèi),實驗過程中直接取50μL樣本上樣即可。當(dāng)有部分樣本值超過標(biāo)準(zhǔn)品濃度時,可用樣本-稀釋液將標(biāo)本進(jìn)行適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行實驗。 

操作注意:

1. 嚴(yán)格按照規(guī)定的時間和溫度進(jìn)行溫育以保證準(zhǔn)確結(jié)果。所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。所有液體組分使用前充分搖勻。

2. 洗板不正確可以導(dǎo)致不準(zhǔn)確的結(jié)果。在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體。溫育過程中不要讓微孔干燥掉。

3. 消除板底殘留的液體和手指印,否則影響OD值。

4. 底物顯色液應(yīng)呈無色或很淺的顏色,已經(jīng)變藍(lán)的底物液不能使用。

5. 避免試劑和標(biāo)本的交叉污染以免造成錯誤結(jié)果。

6. 在儲存和溫育時避免強(qiáng)光直接照射。

7. 平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。

. 任何反應(yīng)試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強(qiáng)烈氣體。任何漂白成分都會破壞試劑盒中反應(yīng)試劑的生物活性。

9. 不能使用過期產(chǎn)品。

10. 如果樣本可能傳播疾病,所有的樣品都應(yīng)管理好,按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測裝置。

試劑的準(zhǔn)備

1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡后方可使用。

2. 20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1:20稀釋,即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。 

洗板方法

1.  手工洗板:甩盡孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,靜置1min后甩盡孔內(nèi)液體,在吸水紙上拍干,如此洗板5次。

2.  自動洗板機(jī):每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5次。

操作步驟

1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.  設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL;

3.  待測樣本孔先加待測樣本50μL,空白孔不加。樣本不足的情況下,上樣量最少10μL。操作方法:待測樣本孔先加待測樣本10μL,再加樣本-稀釋液40μL。

4.  除空白孔外,標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.  棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液(350μL),靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機(jī)洗板)。

6.  每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。

7.  每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長處測定各孔的OD值。

 

實驗結(jié)果計算:

以所測標(biāo)準(zhǔn)品的OD值為橫坐標(biāo),標(biāo)準(zhǔn)品的濃度值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上或用相關(guān)軟件繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,并得到回歸方程,將樣品的OD值代入方程,計算出樣品的濃度。

小鼠紅細(xì)胞生成素(EPO)ELISA檢測試劑盒

試劑盒性能

1.  檢測范圍:0.75 IU/L - 24 IU/L。

2.  靈敏度:最-低檢測濃度小于0.1 IU/L。

3.  特異性:不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。

4.  重復(fù)性:板內(nèi)變異系數(shù)小于10% ,板間變異系數(shù)小于15%

其他注意事項:

1. 最終的實驗結(jié)果與試劑的有效性、實驗者的相關(guān)操作以及當(dāng)時的實驗環(huán)境密切相關(guān),請務(wù)必準(zhǔn)備充足的標(biāo)本備份。

2. 只有全部使用本試劑盒配套試劑才能保證檢測效果,不能混用其他制造商或者不同批次的產(chǎn)品。嚴(yán)格遵守試劑盒的實驗說明才會得到的檢測結(jié)果。

3. 本公司只對試劑盒本身負(fù)責(zé),不對因使用該試劑盒所造成的樣本消耗負(fù)責(zé),請使用者使用前充分考慮到樣本的可能使用量,預(yù)留充足的樣本。

4. 使用化學(xué)裂解液制備的組織勻漿或細(xì)胞提取液可能會由于某些化學(xué)物質(zhì)的引入導(dǎo)致ELISA實驗結(jié)果偏差。

5. 若樣本為細(xì)胞培養(yǎng)上清,因該類樣本干擾因素較多,如:細(xì)胞狀態(tài)、細(xì)胞數(shù)量、采樣時間等,所以可能存在檢測不出的情況。

6. 某些天然蛋白或重組蛋白,包括原核及真核重組蛋白,可能因為與本產(chǎn)品所使用的檢測抗體及捕獲抗體不匹配,而不被檢測出。

操作安全須知:

1) 所有的化學(xué)試劑理應(yīng)被認(rèn)為具有潛在危害,任何的操作都必須提前做好實驗防護(hù)。在操作試劑盒或處理樣本的區(qū)域請不要飲食。

2) 推薦只有經(jīng)過良好實驗室培訓(xùn)的工作人員方可操作本試劑盒。操作時請佩戴合適的防護(hù)設(shè)施,例如白大衣、實驗手套、安全眼鏡等。

3) 請不要讓試劑或樣本接觸皮膚、眼睛和粘膜等身體部位。如不慎接觸,請立即用大量清水清洗。

4) 試劑盒中的終止液為酸性溶液,在使用終止液時,請佩戴防-護(hù)服,做好防護(hù)眼睛、手及面部等的措施。 

5)檢測必須符合實驗室管理規(guī)范的規(guī)定,嚴(yán)格防止交叉污染,所有樣品、洗棄液和各種廢棄物都應(yīng)按照實驗室規(guī)定進(jìn)行處置,嚴(yán)禁隨意丟棄。

6)試劑盒的液體組分中,含有防腐劑,可能引起皮膚過敏反應(yīng),避免吸入煙霧或與皮膚接觸。底物液對皮膚、眼睛和上呼吸道有刺激作用,避免吸入煙霧。戴上防護(hù)手套,實驗完成后徹-底洗手。

免責(zé)聲明

1.   試劑盒僅供研究使用,不得用于臨床實驗或人體實驗,否則所產(chǎn)生的一切后果,由實驗者承擔(dān),本公司概不負(fù)責(zé)。

2.   嚴(yán)格按照說明書中標(biāo)明的時間、加液量及順序進(jìn)行操作,實驗者違反說明書操作,后果由實驗者承擔(dān)。

小鼠紅細(xì)胞生成素(EPO)ELISA檢測試劑盒

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