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Cell Counting Kit-8

點(diǎn)擊次數(shù):1481     發(fā)布時(shí)間:2019/8/12
提 供 商: 信帆生物 資料大?。?/td>
圖片類型: 下載次數(shù): 29
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Cell Counting Kit-8
目錄號(hào) 產(chǎn)品名稱 規(guī)格 包裝
A1210-100 Cell Counting Kit-8 100 T 1ml
A1210-500 Cell Counting Kit-8 500 T 5ml
A1210-1000 Cell Counting Kit-8 1000 T 10ml
A1210-3000 Cell Counting Kit-8 3000 T 30ml
保存:4℃密封避光保存,有效期一年。
產(chǎn)品簡介:
Cell Counting Kit-8 簡稱 CCK-8 試劑盒,為 MTT 法的替代方法,是一種基于 WST(水溶性四唑鹽,化學(xué)
名:2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽)的廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的
快速高靈敏度檢測(cè)試劑盒??捎糜谒幬锖Y選、細(xì)胞增殖測(cè)定、細(xì)胞毒性測(cè)定、腫瘤藥敏等試驗(yàn)
使用說明:
一、制作標(biāo)準(zhǔn)曲線(測(cè)定細(xì)胞具體數(shù)量時(shí))
1、先用細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)所制備的細(xì)胞懸液中的細(xì)胞數(shù)量,然后接種細(xì)胞。
2、按比例依次用培養(yǎng)基等比稀釋成一個(gè)細(xì)胞濃度梯度,一般要做 3-5 個(gè)細(xì)胞濃度梯度,每組 3-6 個(gè)復(fù)孔。
3、接種后培養(yǎng)至細(xì)胞貼壁,然后加 CCK-8 試劑培養(yǎng)一定時(shí)間后測(cè)定 OD 值,制作出一條以細(xì)胞數(shù)量為橫
坐標(biāo)(X 軸),OD 值為縱坐標(biāo)(Y 軸)的標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線可以測(cè)定出未知樣品的細(xì)胞數(shù)量(試用
此標(biāo)準(zhǔn)曲線的前提是實(shí)驗(yàn)的條件要一致,便于確定細(xì)胞的接種數(shù)量以及加入 CCK-8 后的培養(yǎng)時(shí)間。)
二、細(xì)胞活性檢測(cè)
1、在 96 孔板中接種細(xì)胞懸液(100μL/孔)。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱中預(yù)培養(yǎng)(在 37℃,5% CO 2 的條件下)。
2、向每孔加入 10μL CCK-8 溶液(注意不要在孔中生成氣泡,它們會(huì)影響 OD 值的讀數(shù))。
3、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育 1-4 小時(shí)。
4、用酶標(biāo)儀測(cè)定在 450nm 處的吸光度。
5、如果暫時(shí)不測(cè)定 OD 值,打算以后測(cè)定的話,可以向每孔中加入 10μL 0.1M 的 HCl 或者 1%SDS(W/V)
溶液,并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。在 24 小時(shí)內(nèi)吸光度不會(huì)發(fā)生變化。
三、細(xì)胞增值- 毒性檢測(cè)
1、在 96 孔板中配置 100 μL 的細(xì)胞懸液。將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng) 24 小時(shí)(在 37 ℃,5% CO2 的條件下)。
2、向培養(yǎng)板加入 10μL 不同濃度的待測(cè)物質(zhì)。在培養(yǎng)箱孵育一段適當(dāng)?shù)臅r(shí)間(例如:6、12、24 或 48 小時(shí))。
3、向每孔加入 10 μL CCK-8 溶液(注意不要在孔中生成氣泡,它們會(huì)影響 OD 值的讀數(shù))。如果待測(cè)物質(zhì)
有氧化性或還原性的話,可在加 CCK-8 之前更換新鮮培養(yǎng)基(除去培養(yǎng)基,并用培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次,然后加
入新的培養(yǎng)基),去掉藥物影響。
4、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育 1-4 小時(shí)。
5、用酶標(biāo)儀測(cè)定在 450 nm 處的吸光度。
6、如果暫時(shí)不測(cè)定 OD 值,打算以后測(cè)定的話,可以向每孔中加入 10μL 0.1M 的 HCl 或者 1%SDS(W/V)
溶液,并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。在 24 小時(shí)內(nèi)吸光度不會(huì)發(fā)生變化。
2
活力計(jì)算:.
細(xì)胞活力(%)=[A(加藥)-A(空白)]/[A(0 加藥)-A(空白)]×100
A(加藥):具有細(xì)胞、CCK-8 溶液和藥物溶液的孔的吸光度
A(空白):具有培養(yǎng)基和 CCK-8 溶液而沒有細(xì)胞的孔的吸光度
A(0 加藥):具有細(xì)胞、CCK-8 溶液而沒有藥物溶液的孔的吸光度
細(xì)胞活力:細(xì)胞增殖活力或細(xì)胞毒性活力

 
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