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人多巴胺 (DA ) 酶聯(lián)免疫分析

點擊次數(shù):1425     發(fā)布時間:2019/8/5
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人多巴胺 (DA ) 酶聯(lián)免疫 分析
試劑 盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用。
檢測范圍 : 96T
5ng/L -120ng/L
使用目的 :
本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本中多巴胺(DA)含量。
實驗原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中人多巴胺(DA)水平。用純化的人多巴胺(DA)
抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入多巴胺(DA),再與 HRP
標記的多巴胺(DA)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后加底物
TMB 顯色。TMB 在 HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏
色的深淺和樣品中的多巴胺(DA)呈正相關(guān)。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度(OD
值),通過標準曲線計算樣品中人多巴胺(DA)濃度。
試劑盒組成
1 30 倍濃縮洗滌液 20ml×1 瓶 7 終止液 6ml×1 瓶
2 酶標試劑 6ml×1 瓶 8 標準品(240ng/L) 0.5ml×1 瓶
3 酶標包被板 12 孔×8 條 9 標準品稀釋液 1.5ml×1 瓶
4 樣品稀釋液 6ml×1 瓶 10 說明書 1 份
5 顯色劑 A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 張
6 顯色劑 B 液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 個
標本 要求
1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能
馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2.不能檢測含 NaN3 的樣品,因 NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
操作步驟
1. 標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀
釋。
120ng/L 5 號標準品 150µl 的原倍標準品加入 150µl 標準品稀釋液
60ng/L 4 號標準品 150µl 的 5 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液
30ng/L 3 號標準品 150µl 的 4 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液
15ng/L 2 號標準品 150µl 的 3 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液
7.5ng/L 1 號標準品 150µl 的 2 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液
2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、
待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣 50µl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl,
然后再加待測樣品 10µl(樣品終稀釋度為 5 倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡
量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3. 溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。
4. 配液:將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此
重復(fù) 5 次,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標試劑 50µl,空白孔除外。
7. 溫育:操作同 3。
8. 洗滌:操作同 5。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑 A50µl,再加入顯色劑 B50µl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色
15 分鐘.
10. 終止:每孔加終止液 50µl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。
11. 測定:以空白空調(diào)零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。 測定應(yīng)在加終止
液后 15 分鐘以內(nèi)進行。

 
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