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離子交換色譜法

點擊次數(shù):1490     更新時間:2020-11-11

離子交換色譜法



1、儀器與試藥

高效液相色譜系統(tǒng):Agilent1200型,配四元泵、DAD檢測器、自動進樣器及色譜數(shù)據(jù)處理工作站(Agilent公司);SUPELCOSILTMLC-SCX離子交換色譜柱(25cm×4.6mm,5μm,SUPELCO公司)。

馬來酸標準品(SUPELCO公司,純度99.3%);富馬酸標準品(Dr.EhrenstorferGmbH公司,純度99.3%);乙腈(色譜 純,F(xiàn)isher公司);富馬酸(由交大瑞森渭南化學工業(yè)有限責任公司提供);所用其他試劑均為分析純;水為超純水。

2、色譜條件

色譜柱:SUPELCOSILTMLC-SCX離子交換色譜柱(25cm×4.6mm,5μm);流動相:0.005mol?L-1硫酸水溶液-乙腈 (60∶40);流速:0.3mL?min-1;色譜柱溫度:35℃;檢測器:二極管陣列檢測器(DAD);檢測波長:208nm;進樣量:5μL。

應用上述條件,取1.0mg?L-1的馬來酸標準品溶液進樣,取馬來酸為5.0mg?L-1、富馬酸為10.0mg/L-1的混合標準溶液(分離度溶液)進樣。

3、方法與結果

3.1樣品處理稱取富馬酸樣品0.1g,精密稱定,用流動相溶解并定容至100.00mL,過0.45μm微孔濾膜,進樣檢測。

3.2線性關系考察分別配制濃度為0.1,0.2,0.5,1.0,2.0,5.0mg?L-1的馬來酸系列標準溶液,按“2”項下的色譜條件進樣檢 測,并以標準溶液濃度(X,mg?L-1)為橫坐標,峰面積(Y)為縱坐標作圖,同時用zui小二乘法進行線性回歸,得標準曲線回歸方程為 Y=87.916X–0.7097,線性相關系數(shù)r為0.9999,線性關系良好。

3.3精密度與重現(xiàn)性

取濃度為1.0mg?L-1的馬來酸標準溶液,連續(xù)進樣8次,計算8次進樣的峰面積標準偏差,評價檢測方法的精密度,結果如表1所示,峰面積RSD為0.77%,精密度良好。

取同一批樣品,平行處理8份,依法進樣檢測,計算每份樣品中馬來酸含量,考察方法的重現(xiàn)性,結果如表1所示,RSD為3.17%,重現(xiàn)性良好。

表1精密度和重現(xiàn)性實驗結果

精密度實驗

進樣次數(shù)12345678RSD(%)

峰面積85.792687.212286.056187.849787.230186.712986.809587.11570.77

重現(xiàn)性實驗

樣品編號12345678RSD(%)

含量(%)0.01010.01050.01030.00970.00990.00980.00960.01013.17

3.4加標回收率實驗為了考察方法的回收率,對6份富馬酸樣品進行加標回收實驗,加標水平為*水平0.1%,即1.0g?kg-1,回收率在99.4%~100.7%之間,RSD小于1.5%?;厥章手噩F(xiàn)性良好。

3.5檢測限將馬來酸標準溶液稀釋進樣,以10倍噪音(S/N=10)計,本方法zui小檢出濃度為0.05mg?L-1。以稱取0.1g富馬酸樣品,定容100.00mL計算,富馬酸中馬來酸的zui檢出限為0.05g?kg-1,即0.005%。

3.6樣品測定利用本方法測定了5批富馬酸樣品,馬來酸含量分別為0.0072%,0.0091%,0.0128%,0.0102%,0.0155%,均未超出*。

4、討論

實驗中主要考察了檢測的流動相條件,包括乙腈比例、硫酸濃度以及流速對峰形和分離度的影響。實驗結果表明,流動相中的乙腈比例對富馬酸和馬來酸的峰形影 響zui為明顯,當流動相中不含乙腈時,溶劑效應明顯,富馬酸和馬來酸分離度溶液的HPLC色譜圖如圖3所示,色譜峰拖尾嚴重,而且不能達到基線分離,隨著流 動相中乙腈比例的升高,馬來酸和富馬酸的峰形變好,分離度變大,當乙腈為40%時,HPLC色譜圖如圖1-B所示,色譜峰峰形尖銳對稱。流動相中硫酸濃度 對色譜峰峰形影響不大,但對分離度有一定的影響,實驗中考察了硫酸濃度為0.005、0.01mol?L-1兩種情況,發(fā)現(xiàn)硫酸濃度變化對富馬酸的出峰時 間基本沒有影響,而硫酸濃度降低則可以使馬來酸出峰時間前移,分離度變大,所以選用硫酸濃度為0.005mol?L-1。流速對出峰時間和分離度有一定的 影響,而對峰形基本無影響,當流速由0.3mL?min-1變?yōu)?.5mL?min-1后,富馬酸和馬來酸出峰時間均前移,分離度變小,所以選用流速為 0.3mL?min-1不僅能夠增大分離度,而且可以節(jié)省溶劑。選用本文的色譜條件,富馬酸和馬來酸的分離度達到3.1,符合食品法典委員會 (CAC)及美國食用化學品法典(FCC)檢測要求。

馬來酸的紫外吸收圖譜如圖4所示,zui大吸收波長為208nm,富馬酸的紫外吸收與馬來酸基本相同,在本文色譜條件下未發(fā)生文獻報道的zui大紫外吸收波長紅移現(xiàn)象[3],而且在該波長下HPLC色譜基線平穩(wěn),所以選用檢測波長為208nm。

1.馬來酸(maleicacid);2.富馬酸(fumaricacid)

本文建立的檢測方法簡便、快速,重現(xiàn)性良好,而且該方法*符合相關標準的檢測要求,可以為檢測富馬酸中的馬來酸提供有效手段,為保障富馬酸產(chǎn)品的質(zhì)量及對外貿(mào)易提供幫助。

建立離子交換色譜法檢測富馬酸中雜質(zhì)馬來酸。方法:樣品用流動相溶解定容后,采用LC–SCX離子交換色譜柱(25cm×4.6mm,5μm) 分離,以0.005mol?L-1硫酸水溶液–乙腈(60∶40)為流動相,流速0.3mL?min-1,檢測波長208nm。結果:樣品中富馬酸與馬來 酸分離度達到3.1,在0.1~5.0mg?L-1范圍內(nèi),馬來酸峰面積與濃度呈良好的線性關系(r=0.9999),zui低檢出限達到0.05g?kg- 1,重現(xiàn)性良好。結論:該法簡便、快速、靈敏、準確,可用于富馬酸中馬來酸的檢測。

馬來酸(MaleicAcid)又名順丁烯二 酸,是富馬酸的順反異構體,主要在生物試劑過程中引入,其含量高低直接反映生物試劑技術控制水平和產(chǎn)品質(zhì)量,食品法典委員會(CAC)及美國食用化學品法典 (FCC)均規(guī)定富馬酸中馬來酸的含量不得超過0.1%(1g?kg-1),所以建立富馬酸中馬來酸含量檢測方法對于控制富馬酸產(chǎn)品 質(zhì)量具有積極的意義。

關于馬來酸的檢測報道不多,主要為高效液相色譜法[1~3],還有用毛細管電泳法[4]和離子色譜法檢測的 報道(戴安公司提供的資料),但反相高效液相色譜法存在分離度和重現(xiàn)性不理想的問題,而且色譜峰較寬,而毛細管電泳和離子色譜在我國還不夠普及,本文利用 離子交換色譜柱對富馬酸中馬來酸進行檢測,色譜峰形良好,分離度可達3.0以上,而且流動相流速只有0.3mL?min-1,可節(jié)省溶劑,方法簡便、快 速、準確,實用性強,符合雜質(zhì)檢測要求。

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