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信帆生物歡樂知識大講堂開課啦!石蠟切片常見問題解析

點擊次數(shù):1664     更新時間:2020-08-07

 信帆生物歡樂知識大講堂開課啦!石蠟切片常見問題解析!

大家都清楚樣本的制備是IHC實驗成功的前提條件。樣本完成石蠟包埋后,需要成約3-4um的薄片。本文主要介紹了切片小技巧及過程中容易出現(xiàn)的幾種問題?

切片小技巧

① 組織切片,舊刀修片,新刀切片。

②切片厚度3-4μm(淋巴結、扁桃體、鼻咽、扁桃體2-3μm;脂肪5-6μm)

④切片動作輕,用力均勻。

⑥刀片鋒利,切片角度5°佳,切片平整無褶皺和收縮。

⑧蠟塊表面有鈣點,應20%HCL表面泡1-2h,水洗后切。

切片光面朝下展片、撈片。

?攤片水溫利于展平又不熔化,必要時用20%酒精攤片。

?細小組織(穿刺、內(nèi)鏡小標本)可以多貼幾個。

?在烘烤切片前應做好排水,烤片溫度高于石蠟熔點5-10℃

 

 

問題1 細胞皺縮和收縮;核“起泡”變大損傷;膠原染色嗜堿性

原因:石蠟溫度過高。

解決方法:烤箱溫度高于石蠟熔點5-10℃為佳。


問題2 切片卷成致密團

原因:①刀鈍;②傾斜角太小;③切片太厚。

解決方法:①換新刀片;②如果間隙角充分,降低傾刀的斜度。

 

問題3 切片破碎或切不成片 

①組織固定、脫水、透明不*,浸蠟不透;浸蠟包埋溫度過高或時間過久。

解決方法:①優(yōu)化組織處理;②及時更換試劑;③重新脫水補救;或者重取。

 

 問題4  切片不連片


原因:刀刃不鋒利,刀間隙角度大;蠟塊內(nèi)組織上下端留蠟邊太少或不整齊,刀邊碎片;室溫過低或石蠟過硬。

移動刀口或更換刀片,檢查刀的角度,清潔刀片和刀架背面;在低熔點的石蠟中重新包埋;提高室內(nèi)溫度或溫暖蠟塊表面(哈氣等);切片厚度適宜(根據(jù)組織類型)。

 問題5  組織切片不完整,缺損

①取材時未取中病灶,組織塊太大,太厚;③組織塊內(nèi)組織不平坦;⑤切片時粗修過多(切削過深)或過少(沒切到足夠的深度)。

解決方法:②組織在包埋模中均勻鋪平;④切片方向:軟到硬,易到難,主到次。

 信帆生物歡樂知識大講堂開課啦!石蠟切片常見問題解析!

 

 

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