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免疫熒光實驗檢測有直接法和間接法兩種您知道嗎?

點擊次數(shù):4857     更新時間:2018-08-10

免疫熒光實驗檢測有直接法和間接法兩種您知道嗎?信帆生物提供免疫熒光實驗技術(shù)服務(wù),檢測效果好,時間短,數(shù)據(jù)真實有效,提供圖片,實驗報告,實驗室儀器型號,所用抗體型號等,如果您對免疫熒光實驗檢測感興趣可找信帆生物,為您的科研實驗助力!

免疫熒光技術(shù)(Immunofluorescence technique)又稱熒光抗體技術(shù),是標記免疫技術(shù)中發(fā)展很早的一種。它是在免疫學(xué)、生物化學(xué)和顯微鏡技術(shù)的基礎(chǔ)上建立起來的一項技術(shù)。很早以來就有一些學(xué)者試圖將抗體分子與一些示蹤物質(zhì)結(jié)合,利用抗原抗體反應(yīng)進行組織或細胞內(nèi)抗原物質(zhì)的定位。它是根據(jù)抗原抗體反應(yīng)的原理,先將已知的抗原或抗體標記上熒光基團,再用這種熒光抗體(或抗原)作為探針檢查細胞或組織內(nèi)的相應(yīng)抗原(或抗體)。利用熒光顯微鏡可以看見熒光所在的細胞或組織,從而確定抗原或抗體的性質(zhì)和定位。

 

免疫熒光技術(shù)是根據(jù)抗原抗體反應(yīng)的原理,先將已知的抗原或抗體標記上熒光素,制成熒光抗體,再用這種熒光抗體(或抗原)作為探針檢測組織或細胞內(nèi)的相應(yīng)抗原(或抗體)。在組織或細胞內(nèi)形成的抗原抗體復(fù)合物上含有標記的熒光素,利用熒光顯微鏡觀察標本,熒光素受外來激發(fā)光的照射而發(fā)生明亮的熒光(黃綠色或橘紅色),可以看見熒光所在的組織細胞,從而確定抗原或抗體的性質(zhì)、定位,以及利用定量技術(shù)測定含量。

免疫熒光有直接法和間接法兩種。(1)直接法:將標記的特異性熒光抗體,直接加在抗原標本上,經(jīng)一定的溫度和時間的染色,用水洗去未參加反應(yīng)的多余熒光抗體,室溫下干燥后封片、鏡檢。(2)間接法:如檢查未知抗原,先用已知未標記的特異抗體(抗體)與抗原標本進行反應(yīng),用水洗去未反應(yīng)的抗體,再用標記的抗抗體(第二抗體)與抗原標本反應(yīng),使之形成抗原—抗體—抗體復(fù)合物,再用水洗去未反應(yīng)的標記抗體,干燥、封片后鏡檢。如果檢查未知抗體,則表明抗原標本是已知的,待檢血清為抗體,其它步驟的抗原檢查相同。標記的抗抗體是抗球蛋白抗體,同于血清球蛋白有種的特異性。

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免疫熒光染色

固定

將細胞爬片用0.02M PBS洗去培養(yǎng)基,再用4%甲醛固定30min,0.02M PBS洗3min×3次;

一抗孵育

滴加一抗(選擇稀釋比例),濕盒孵育, 4℃孵育過夜。0.02M PBS沖洗3min×3次。

二抗孵育

滴加合適比例稀釋的熒光二抗,濕盒孵育,室溫下放置1h。0.02M PBS沖洗3min×3次。

封片和拍照

防淬滅封片劑與DAPI 1:500稀釋封片,-20℃冰箱保存,熒光顯微鏡拍片。

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