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γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶真的太棒了!

點擊次數(shù):1628     更新時間:2018-02-28

γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶真的太棒了!

產(chǎn)品內(nèi)容:
試劑一:液體×1瓶,4℃保存。
試劑二:粉劑×1瓶,4℃保存。
試劑三:液體×1瓶,4℃保存。
試劑四:液體×1瓶,4℃保存。
工作液(在試劑二瓶中配制):臨用前配制,把試劑三倒入試劑二瓶中,充分溶解(室溫過低
時可以40℃水浴促進溶解);然后把試劑四倒入試劑二瓶中,混勻后室溫保存。
產(chǎn)品說明:
γ-GT是γ-谷氨酰循環(huán)中的關(guān)鍵酶,催化GSH降解。γ-GT催化GSH或者其他γ-谷氨?;衔锷?br />的γ-谷氨酰基轉(zhuǎn)移到受體。也可以催化GSH和其他γ-谷氨酰基化合物的水解,產(chǎn)生谷氨酸鹽,在細
胞外谷胱甘肽新陳代謝中起了重要的作用。
γ-GT催化谷氨酰對硝基苯胺中γ-谷氨?;D(zhuǎn)移給N-甘氨酰甘氨酸,生成對硝基苯胺,在405nm
有特征光吸收;通過測定405nm光吸收增加速率,來計算γ-GT酶活性。
自備儀器和用品
可見分光光度計、低溫離心機、水浴鍋、可調(diào)節(jié)移液器、1mL玻璃比色皿和蒸餾水

γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶真的太棒了!
 

操作步驟:
一、粗酶液提取
1. 組織:按照組織質(zhì)量(g):試劑一體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL
試劑一)進行冰浴勻漿。8000g,4℃離心15min,取上清,置冰上待測。
2. 細菌、真菌:按照細胞數(shù)量(10
4個):試劑一體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬細
胞加入1mL試劑一),冰浴超聲波破碎細胞(功率300w,超聲3秒,間隔7秒,總時間3min);
然后8000g,4℃,離心15min,取上清置于冰上待測。
3. 血清等液體:直接測定。
二、γ-GT 測定操作
1. 分光光度計預(yù)熱 30min,調(diào)節(jié)波長到 405 nm,蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑二置于 25℃(一般物種)或者 37℃(哺乳動物)水浴中預(yù)熱 30min(保證無沉淀)。
3. 測定管:取 1mL 玻璃比色皿,依次加入 100μL 上清液,900μL 工作液,混勻后于 405nm 測定
10 s 和 70 s 時吸光度,記為 A1 和 A2。、

注意事項:
1. 培養(yǎng)細胞中γ-GT活性測定時,細胞數(shù)目須在300萬-500萬之間,細胞中γ-GT的提取時可加試劑一
后研磨或超聲波處理,不能用細胞裂解液處理細胞(防止因為蛋白質(zhì)變性導致酶失活)。
2. 配置好的工作液2周內(nèi)使用完畢。

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