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產(chǎn)品內(nèi)容：
1. 封閉試劑：30g(可配制400ml)。
2. 10 倍濃縮抗體稀釋液，50ml。
3. HRP 標(biāo)記二抗，0.3ml，效價(jià)1：500-1000。
4. ECL 顯色液，25mlA+25mlB。

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：
SDS-PAGE電泳后，蛋白質(zhì)按照分子量大小分離，轉(zhuǎn)移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）后，固相載體
以非共價(jià)鍵形式吸附蛋白質(zhì)，以固相載體上的蛋白質(zhì)或多肽作為抗原，與對(duì)應(yīng)的抗體起免疫反應(yīng)，再與酶標(biāo)記的第二抗體起反應(yīng)，加入發(fā)光底物后，能讓膠片感光。經(jīng)顯影和定影后，可以在膠片上顯示出條帶（抗原所在位置）。

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操作步驟：(僅供參考)

常規(guī)電泳轉(zhuǎn)膜后:

1) 清洗轉(zhuǎn)印膜：將膜剝離下后，作好標(biāo)記，一般在左上角剪一缺口。室溫用TBS-T 漂洗3 次每次5min,以盡量洗去轉(zhuǎn)印膜上的SDS，防止影響后面的抗體結(jié)合。

2) 按5g 封閉試劑加100ml 雙蒸水計(jì)，配制膜封閉液，配好的膜封閉液為乳白色懸液，將漂洗過(guò)的轉(zhuǎn)印膜放入封閉液內(nèi)，置搖床孵育，室溫封閉30min。用TBS-T 緩沖液（PH7.6）洗膜，室溫漂洗3 次每次5min。

3) 將10×抗體稀釋液用雙蒸水稀釋成1×（10ml 10×抗體稀釋液加入90ml 雙蒸水，混勻，可4℃保存三個(gè)月）。此稀釋液可作為一抗和二抗的稀釋液。

4) 用1×的抗體稀釋液稀釋一抗。根據(jù)用量以及一抗的稀釋濃度來(lái)稀釋一抗。將雜交膜放入雜交袋中，加入一抗工作液，封口，4℃孵育過(guò)夜或37℃搖動(dòng)孵育2h。此用過(guò)的抗體一般可回收第二天再使用一次。注：如果所加一抗不同，可在此步將膜沿電泳方向剪成條，分別作好標(biāo)記，分開(kāi)孵育。

5) 用TBS-T 緩沖液（PH7.6）洗膜，室溫漂洗3 次每次5min。

6) 用1×的抗體稀釋液稀釋二抗。根據(jù)用量，按10ml 抗體稀釋液加入15ul HRP 標(biāo)記二抗的比例，配制二抗工作液。將雜交膜放入雜交袋中，加入二抗工作液，封口， 37℃搖動(dòng)孵育1h。此用過(guò)的抗體一般可回收第二天再使用一次。

7) 用TBS-T 緩沖液（PH7.6）洗膜，室溫漂洗3 次每次10min。

8) 根據(jù)用量，取ECL 發(fā)光液A、B 等量混勻，加在膜正面，暗室顯色1-5 分種。傾去顯色液，小心用紙吸去顯色液，在上面蓋一層平整的透明紙。再取出感光膠片，做好標(biāo)記，輕輕的放在膜上，顯色30 秒到1 分鐘，取出膠片浸入顯影液中，觀察顯se情況，再放入定影液中1 分鐘。根據(jù)條帶強(qiáng)弱，再次感光時(shí)可減短或者加長(zhǎng)感光時(shí)間（從5 秒到30 分鐘）以期達(dá)到理想結(jié)果。

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