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信帆生物探究免疫組化

點(diǎn)擊次數(shù):1207     更新時(shí)間:2016-12-28

一、免疫組化技術(shù)的基本原理

  應(yīng)用免疫學(xué)及組織化學(xué)原理,對(duì)組織切片或細(xì)胞標(biāo)本中的某些化學(xué)成分進(jìn)行原位的定性、定位或定量研究,這種技術(shù)稱為免疫組織化學(xué)技術(shù)或免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)。

  *,抗體與抗原之間的結(jié)合具有高度的特異性。免疫組化正是利用這一特性,即先將組織或細(xì)胞中的某些化學(xué)物質(zhì)提取出來,以其作為抗原或半抗原去免疫小鼠等實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,制備特異性抗體,再用這種抗體(*抗體)作為抗原去免疫動(dòng)物制備第二抗體,并用某種酶(常用辣根過氧化物酶)或生物素等處理后再與前述抗原成分結(jié)合,將抗原放大,由于抗體與抗原結(jié)合后形成的免疫復(fù)合物是無色的,因此,還必須借助于組織化學(xué)方法將抗原抗體反應(yīng)部位顯示出來(常用顯色劑DAB顯示為棕黃色顆粒)。通過抗原抗體反應(yīng)及呈色反應(yīng),顯示細(xì)胞或組織中的化學(xué)成分,在顯微鏡下可清晰看見細(xì)胞內(nèi)發(fā)生的抗原抗體反應(yīng)產(chǎn)物,從而能夠在細(xì)胞或組織原位確定某些化學(xué)成分的分布、含量。組織或細(xì)胞中凡是能作抗原或半抗原的物質(zhì),如蛋白質(zhì)、多肽、氨基酸、多糖、磷脂、受體、酶、激素、核酸及病原體等都可用相應(yīng)的特異性抗體進(jìn)行檢測(cè)。

二、免疫組織化學(xué)染色方法

1、按標(biāo)記物質(zhì)的種類,如熒光染料、放射性同位素、酶(主要有辣根過氧化物酶和堿性磷酸酶)、鐵蛋白、膠體金等,可分為免疫熒光法、放射免疫法、酶標(biāo)法和免疫金銀法等。

2、按染色步驟可分為直接法(又稱一步法)和間接法(二步、三步或多步法);與直接法相比,間接法的靈敏度提高了許多。

3、按結(jié)合方式可分為抗原—抗體結(jié)合,如過氧化物酶-抗過氧化物酶(PAP)法和親和連接,如卵白素-生物素-過氧化物酶復(fù)合物(ABC)法、鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶連結(jié)(SP)法等,其中SP法是zui常用的方法。

三、幾種常用免疫組織化學(xué)方法的原理

1、免疫熒光方法

   是zui早建立的免疫組織化學(xué)技術(shù)。它利用抗原抗體特異性結(jié)合的原理,先將已知抗體標(biāo)上熒光素,以此作為探針檢查細(xì)胞或組織內(nèi)的相應(yīng)抗原,在熒光顯微鏡下觀察。當(dāng)抗原抗體復(fù)合物中的熒光素受激發(fā)光的照射后即會(huì)發(fā)出一定波長(zhǎng)的熒光,從而可確定組織中某種抗原的定位,進(jìn)而還可進(jìn)行定量分析。由于免疫熒光技術(shù)特異性強(qiáng)、靈敏度高、快速簡(jiǎn)便,所以在病理診斷、檢驗(yàn)中應(yīng)用比較廣。

2、免疫酶標(biāo)方法

免疫酶標(biāo)方法是繼免疫熒光后,于60年代發(fā)展起來的技術(shù)。基本原理是先以酶標(biāo)記的抗體與組織或細(xì)胞作用,然后加入酶的底物,生成有色的不溶性產(chǎn)物或具有一定電子密度的顆粒,通過光鏡或電鏡,對(duì)細(xì)胞表面和細(xì)胞內(nèi)的各種抗原成分進(jìn)行定位研究。免疫酶標(biāo)技術(shù)是目前zui常用的技術(shù)。

  本方法與免疫熒光技術(shù)相比的主要優(yōu)點(diǎn)是:定位準(zhǔn)確,對(duì)比度好,染色標(biāo)本可保存,適合于光、電鏡研究等。

  免疫酶標(biāo)方法的發(fā)展非常迅速,已經(jīng)衍生出了多種標(biāo)記方法,且隨著方法的不斷改進(jìn)和創(chuàng)新,其特異性和靈敏度都在不斷提高,使用也越來越方便。目前在病理診斷中廣為使用的當(dāng)屬PAP法、ABC法、SP法等。

3、免疫膠體金技術(shù)

  免疫膠體金技術(shù)是以膠體金這樣一種特殊的金屬顆粒作為標(biāo)記物。膠體金是指金的水溶膠,它能迅速而穩(wěn)定地吸附蛋白,對(duì)蛋白的生物學(xué)活性則沒有明顯的影響。因此,用膠體金標(biāo)記一抗、二抗或其他能特異性結(jié)合免疫球蛋白的分子(如葡萄球菌A蛋白)等作為探針,就能對(duì)組織或細(xì)胞內(nèi)的抗原進(jìn)行定性、定位,甚至定量研究。由于膠體金有不同大小的顆粒,且膠體金的電子密度高,所以免疫膠體金技術(shù)特別適合于免疫電鏡的單標(biāo)記或多標(biāo)記定位研究。由于膠體金本身呈淡至深紅色,因此也適合進(jìn)行光鏡觀察。如應(yīng)用銀加強(qiáng)的免疫金銀法則更便于光鏡觀察。

四、免疫組化技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)

1、特異性強(qiáng) 免疫學(xué)的基本原理決定了抗原與抗體之間的結(jié)合具有高度特異性,因此,免疫組化從理論上講也是組織細(xì)胞中抗原的特定顯示,如角蛋白(keratin)顯示上皮成分,LCA顯示淋巴細(xì)胞成分。只有當(dāng)組織細(xì)胞中存在交叉抗原時(shí)才會(huì)出現(xiàn)交叉反應(yīng)。

2、敏感性高 在應(yīng)用免疫組化的起始階段,由于技術(shù)上的限制,只有直接法、間接法等敏感性不高的技術(shù),那時(shí)的抗體只能稀釋幾倍、幾十倍;現(xiàn)在由于ABC法或SP法的出現(xiàn),使抗體稀釋上千倍、上萬倍甚億倍仍可在組織細(xì)胞中與抗原結(jié)合,這樣高敏感性的抗體抗原反應(yīng),使免疫組化方法越來越方便地應(yīng)用于常規(guī)病理診斷工作。

3、定位準(zhǔn)確、形態(tài)與功能相結(jié)合 該技術(shù)通過抗原抗體反應(yīng)及呈色反應(yīng),可在組織和細(xì)胞中進(jìn)行抗原的準(zhǔn)確定位,因而可同時(shí)對(duì)不同抗原在同一組織或細(xì)胞中進(jìn)行定位觀察,這樣就可以進(jìn)行形態(tài)與功能相結(jié)合的研究,對(duì)病理學(xué)研究的深入是十分有意義的。

 

信帆生物公司主要代理產(chǎn)品:
ELISA試劑盒:進(jìn)口ELISA試劑盒,國(guó)產(chǎn)ELISA試劑盒,人elisa試劑盒,大鼠ELISA試劑盒,小鼠ELISA試劑盒等。
培養(yǎng)基:微生物培養(yǎng)基,顯色培養(yǎng)基,BD培養(yǎng)基,gibco培養(yǎng)基等。
血清:胎牛血清,人血清,動(dòng)物血清,NQBB,Hyclone,Gbico原裝血清 。
生物試劑:Amresco,Sigma,ABM,BIO-RAD,BD,ABCAM等進(jìn)口試劑。
標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照品:進(jìn)口對(duì)照品,進(jìn)口對(duì)照藥材,進(jìn)口標(biāo)準(zhǔn)品.
抗體:一抗,二抗,流式抗體等。
放免檢測(cè)服務(wù):進(jìn)口放免檢測(cè)服務(wù),國(guó)產(chǎn)放免檢測(cè)服務(wù),進(jìn)口美國(guó)鳳凰等放免檢測(cè)服務(wù)。
實(shí)驗(yàn)室代測(cè)服務(wù):放免代測(cè),WB實(shí)驗(yàn),免疫組化代測(cè),熒光定量PCR代測(cè),病理細(xì)胞染色代測(cè),生化實(shí)驗(yàn)代測(cè)等。

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