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β-半乳糖苷酶染色實(shí)驗(yàn)檢測(cè)服務(wù)

點(diǎn)擊次數(shù):310     更新時(shí)間:2025-02-24

β-半乳糖苷酶染色實(shí)驗(yàn)檢測(cè)服務(wù)

服務(wù)介紹:β-半乳糖苷酶染色是一種用于檢測(cè)細(xì)胞衰老(senescence)或基因表達(dá)(如LacZ報(bào)告基因)的常用方法。β-半乳糖苷酶(β-galactosidase)是一種水解酶,在衰老細(xì)胞中活性顯著升高,因此該實(shí)驗(yàn)常用于衰老相關(guān)研究。

檢測(cè)原理:β-半乳糖苷酶在酸性條件下(pH 6.0)能夠水解底物X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷),生成不溶性的藍(lán)色產(chǎn)物(5-溴-4-氯靛藍(lán)),從而在細(xì)胞中形成藍(lán)色沉淀。衰老細(xì)胞中β-半乳糖苷酶活性較高,因此染色后呈現(xiàn)明顯的藍(lán)色。

一、樣本準(zhǔn)備

細(xì)胞樣本:

吸除細(xì)胞培養(yǎng)液,用PBS或HBSS洗滌細(xì)胞。

加入染色固定液,室溫固定一段時(shí)間(如15分鐘)。

吸除固定液,再次用PBS或HBSS洗滌細(xì)胞。

組織樣本:

對(duì)于石蠟切片,進(jìn)行脫蠟處理,并用PBS洗滌。

對(duì)于冰凍切片,直接加入染色固定液進(jìn)行固定。

二、染色液配制

按照一定比例(如A液和B液各10μl,C液930μl,再加入50μl的X-Gal溶液)配制β-半乳糖苷酶染色工作液。

確保工作液完全融化,必要時(shí)可在37℃烘箱中溶解。

三、染色與孵育

將配制好的染色工作液均勻滴加到細(xì)胞樣本上,或?qū)⒔M織切片完全浸泡在染色工作液中。

37℃條件下孵育過(guò)夜,注意孵育過(guò)程不能在二氧化碳培養(yǎng)箱中進(jìn)行,以免影響染色工作液的pH值。

四、洗滌與觀察

孵育結(jié)束后,用PBS洗滌樣本,去除多余的染色液。

在普通光學(xué)顯微鏡下觀察樣本,尋找染成藍(lán)色的細(xì)胞或組織區(qū)域,這些區(qū)域表示存在β-半乳糖苷酶活性。

注意事項(xiàng):

1、操作安全:β-Gal Fixative有一定的腐蝕性和氣味,操作時(shí)請(qǐng)注意防護(hù)。

2、工作液配置:工作液需要現(xiàn)用現(xiàn)配,避免低溫導(dǎo)致結(jié)晶。

3、樣品處理:取材和固定過(guò)程要規(guī)范標(biāo)準(zhǔn),避免細(xì)胞或組織受損影響染色結(jié)果。

4、染色時(shí)間:染色時(shí)間需要適中,過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短都可能影響染色效果。

5、顯微鏡觀察:觀察時(shí)需要使用合適的光學(xué)顯微鏡,并調(diào)整適當(dāng)?shù)姆糯蟊稊?shù)和光強(qiáng)。

僅供科研實(shí)驗(yàn)用,不做其他用途!

 

 

 


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