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提供高品質(zhì)免疫印跡WB檢測(cè)服務(wù)

點(diǎn)擊次數(shù):679     更新時(shí)間:2023-02-03

上海信帆代做實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目:ELISA檢測(cè),免疫組化檢測(cè),免疫印跡Western Blot檢測(cè),放射免疫檢測(cè),實(shí)時(shí)熒光定量PCR,免疫組化檢測(cè),Masson染色檢測(cè)等病理學(xué)檢測(cè)技術(shù)服務(wù)等等!報(bào)告均提供實(shí)驗(yàn)室儀器型號(hào),提供操作詳細(xì)步驟!


蛋白質(zhì)免疫印跡法 (Western Blot ) ,簡(jiǎn)稱WB ,是指通過SDS-PAGE膠將不同分子量的蛋白質(zhì)分離開,然后將目標(biāo)蛋白轉(zhuǎn)移到載體(PVDF)膜上,利用抗原抗體的特異性結(jié)合,用特異性的一抗結(jié)合目標(biāo)蛋白,用HRP標(biāo)記的二抗結(jié)合一抗,再加以ECL發(fā)光液顯色,檢測(cè)組織或者細(xì)胞內(nèi)某種或者某些特異性蛋白質(zhì)的表達(dá)。蛋白質(zhì)免疫印跡是做蛋白質(zhì)分析的一種常規(guī)技術(shù),常用于鑒定某種蛋白,并能對(duì)蛋白進(jìn)行定性和半定量分析,還可以用于蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)、蛋白質(zhì)-DNA、蛋白質(zhì)-RNA相互作用后續(xù)分析。



WB實(shí)驗(yàn)代測(cè)原理: 1、WB實(shí)驗(yàn)代測(cè)采用的是聚丙烯先胺凝膠電泳,被檢測(cè)物是蛋白質(zhì),“探針"是抗體,“顯色"用標(biāo)記的二抗。經(jīng)過PAGE(聚丙烯先胺凝膠電泳)分離的蛋白質(zhì)樣品,轉(zhuǎn)移到固相載體(例如硝酸纖維素薄膜)上,固相載體以非共價(jià)鍵形式吸附蛋白質(zhì),且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學(xué)活性不變。
2、以固相載體上的蛋白質(zhì)或多肽作為抗原,與對(duì)應(yīng)的抗體起免疫反應(yīng),再與酶或同位素標(biāo)記的第二抗體起反應(yīng),經(jīng)過底物顯色或放射自顯影以檢測(cè)電泳分離的特異性目的基因表達(dá)的蛋白成分。該技術(shù)也廣泛應(yīng)用于檢測(cè)蛋白水平的表達(dá)。

以上是小編為大家講解的原理,那么小編接下來進(jìn)一步講解基本過程有哪些?

二:WB實(shí)驗(yàn)代測(cè)基本過程:
1、獲取細(xì)胞或組織裂解物。
2、根據(jù)檢測(cè)蛋白的位置選擇合適的裂解buffer。
3、選擇合適的蛋白酶抑制劑,避免蛋白降解,從而保證檢測(cè)的準(zhǔn)確性。
4、蛋白定量。
5、電泳分離蛋白質(zhì)。
6、轉(zhuǎn)膜:根據(jù)不同的檢測(cè)目的和待測(cè)蛋白的特性,選擇合適的膜類型。
7、封閉:去掉膜上多余的非特異性結(jié)合位點(diǎn),降低背景。

以上就是小編為大家介紹的全部?jī)?nèi)容,希望對(duì)大家有所幫助。

 

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